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液相色谱法测定雷公藤片中雷公藤内酯醇的含量及含量均匀度

点击次数:112  发布时间:2019-01-16
  摘要
 
  采用液固萃取—液相色谱法测定雷公藤片中雷公藤内酯醇的含量,方法灵敏、准确,重现性好,回收率为98.8%。考察了雷公藤片微量有效成分雷公藤内酯醇的均匀性,为进一步提高雷公藤片的质量提供了依据。
 
  雷公藤片是以雷公藤根提取物(有效部位)为原料制备的浸膏片,是治疗类风湿性关节炎的有效药物,其微量有效成分雷公藤内酯醇是其质量控制指标。 雷公藤内酯醇在片剂中的含量与临床疗效和毒副作用相关,因此,考察其在片剂中的均匀性对临床用药和进一步提高雷公藤片内在质量很有必要。雷公藤片质量控制 报道有薄层色谱扫描法。我们采用液固萃取法预处理样品,用液相色谱法测定了雷公藤片中雷公藤内酯醇的含量及含量均匀度,方法灵敏度高,操作简便,重现 性好。
 
  1、实验部分
 
  1.1 仪器与试药日本岛津LC—6A液相色谱仪;CR—3A数据处理机;SPD—6AV可见—紫外检测器;雷公藤内酯醇对照品(自制,熔点 226~229℃,紫外、红外、质谱、核磁共振4谱数据与文献一致,液相色归一化法测定含量为98.88%);雷公藤片为市售;甲醇(优级纯,北京化 工厂);重蒸水;PT—中性氧化铝预处理柱(河北津杨滤材厂);其它化学试剂均为分析纯。
 
  1.2 试样的预处理取雷公藤片适量,置5mL具塞离心管中,精密加甲醇—乙酸乙酯—石油醚(1∶1∶1)混合溶媒4mL,超声提取10min,静置10min, 精密吸取上清液0.2mL上样于PT—中性氧化铝预处理柱(预柱预先用5mL洗脱液冲洗备用),用8mL上述混合溶媒洗脱,挥干溶剂,用甲醇0.2mL溶 解,得供试品溶液。
 
  1.3 液相色谱条件色谱柱:Shim-PackCLCODS6.0mm×150mm,预柱:ODS4.6mm×20mm,10μm(大连依利特科学仪器 有限公司),流动相:甲醇—磷酸盐缓冲液(pH4.0)(43∶57,V/V),流速1mL/min,柱温30℃,检测波 长:224nm,0.04AUFS。在上述条件下,雷公藤内酯醇保留时间为15min,
 
  1.4 标准曲线的绘制
 
  1.4.1 标准溶液的配制精密称取雷公藤内酯醇对照品适量,用甲醇溶解,配制成浓度为52mg/L的标贮液。精密吸取标贮液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL于10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
 
  1.4.2 标准曲线的绘制取各浓度的雷公藤内酯醇标准溶液各10μL,按以上色谱条件进行测定。以进样量(μg)和相应的峰高(h)作标准曲线,其回归方程为:
 
  h=1.516C-0.015r=0.9999
 
  在0.013~0.41μg范围内线性关系良好。
 
  1.5 加样回收率试验称取已知含量的雷公藤片粉末100mg(相当于1片片重)一式6份,分别置10mL具塞离心管中,其中3份精密加入雷公藤内酯醇标准溶液 (25.86mg/L)1mL,另3份加入2mL,按试样预处理项下操作,进样10μL进行色谱测定,回收率(n=3)分别为98.4%、 99.2%,RSD分别为1.9%、1.6%,平均回收率为98.8%。
 
  1.6 精密度试验将雷公藤内酯醇标准溶液(20.69mg/L)进样10μL,重复进样6次,RSD为2.0%。
 
  1.7 样品测定
 
  1.7.1 含量测定取本品20片,去糖衣,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于1片片重),按样品预处理项下处理后,进样10μL进行色谱测定,用外标法计算含量。
 
  1.7.2 含量均匀度考察上述3个批号雷公藤片每批号随机取10片,去糖衣,分别置5mL具塞离心管中,逐片按样品预处理项下处理后,进样10μL进行色谱测定,用 外标法计算含量。按中国药典1995年版附录XE方法计算,含量均匀度范围(相当于标示量)分别为:57%~92%、44%~92%、 102%~137%,A+1.8S值分别为43.6、49.5、31.3。
 
  2、讨论
 
  2.1 雷公藤片经超声提取后,提取液呈棕红色,直接进样会污染色谱柱,且分离效果差。采用PT—中性氧化铝预处理柱处理样品后,雷公藤内酯醇被完全洗脱,而极性 杂质滞留在柱上,使试样得到预分离和净化。此法较常规色谱柱具有重现性好,快速、简便,洗脱剂用量少等优点。
 
  2.2 本实验进行了甲醇—水、甲醇—磷酸盐缓冲液不同配比、不同pH值(2.5~7.0)、不同柱温(20~30℃)的摸索试验,结果表明,甲醇—磷酸盐缓冲液(pH4.0)(43∶57)的系统分离效果更好。
 
  2.3 雷公藤内酯醇为雷公藤根提取物(浸膏)中生物活性高的微量有效成分和主要毒性成分,以其为质控指标可以控制雷公藤片的质量。本实验雷公藤片的均匀性考察结 果表明,市售雷公藤片中雷公藤内酯醇的含量存在不均匀性。我们认为生产厂家必须严格控制生产过程的各个环节,尽可能地提高雷公藤片的含量均匀性,以保证制 剂的质量,使临床用药安全、稳定、有效。(来源:中国色谱技术网)
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